La 2e édition de La Madrid Challenge by La Vuelta a lieu le 11 septembre 2016. C'est la dernière épreuve de l'UCI World Tour féminin 2016. Elle se déroule en lever de rideau de la 21e étape du Tour d'Espagne 2016 qui s'est terminée à Madrid. Elle est remportée au sprint par Jolien D'Hoore devant sa coéquipière Chloe Hosking et Marta Bastianelli.