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L’acide 5,10-méthényltétrahydrofolate est un dérivé de l'acide folique, ou vitamine B9. Sa forme biologiquement active est la forme ionique (déprotonée) de l'acide, le 5,10-méthényltétrahydrofolate, couramment abrégé en 5,10-CH=THF, une coenzyme qui donne et reçoit des groupes méthényle –CH=. Il est issu du 5,10-méthylènetétrahydrofolate par la ou la . Il peut également être produit comme intermédiaire dans le catabolisme de l'histidine par la à partir de l'acide 5-formiminotétrahydrofolique. Le 5,10-CH=THF est un substrat de la , qui le convertit en acide 10-formyltétrahydrofolique.